利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2016112205868
申请人: 浙江丹晖生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-27
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种TIL细胞体外扩增培养基组合,包括诱导培养基、增殖培养基和活化适应培养基;

所述诱导培养基的组成成分包括:基础培养基、灭活动物血清、香菇多糖、黄芪多糖、党参多糖和枸杞多糖;

所述增殖培养基的组成成分包括:基础培养基、灭活动物血清、白细胞介素和单克隆抗体;

所述活化适应培养基包括:基础培养基、胰岛素、转铁蛋白和谷氨酰胺。

2.根据权利要求1所述的培养基组合,其中,所述白细胞介素为IL-7、IL-12和IL-15中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的培养基组合,其特征在于,所述白细胞介素为IL-7、IL-12和IL-15。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的培养基组合,其中,所述单克隆抗体为CD3单克隆抗体、CD134单克隆抗体和PD-1单克隆抗体中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的培养基组合,其中,所述基础培养基为AIM-V培养基和RPMI-

1640培养基中的至少一种,所述灭活动物血清为胎牛血清。

6.根据权利要求1-3和5所述的培养基组合,其中,所述诱导培养基包括以下含量的各组分:香菇多糖20-50μg/mL、黄芪多糖20-50μg/mL、党参多糖20-50μg/mL、枸杞多糖20-50μg/mL、体积百分含量为5-10%的胎牛血清;AIM-V培养基与RPMI-1640培养基的体积比为1:1-

1.4。

7.根据权利要求6所述的培养基组合,其中,所述增殖培养基包括以下含量的各组分:IL-7 5-15ng/mL、IL-12 5-15ng/mL、IL-15 5-15ng/mL、CD3单克隆抗体10-30ng/mL、CD134单克隆抗体10-30ng/mL、PD-1单克隆抗体10-30ng/mL、体积百分含量为5-10%的胎牛血清;AIM-V培养基与RPMI-1640培养基的体积比为1:1.2-1.6。

8.根据权利要求1-3和7中任意一项所述的培养基组合,其中,所述活化适应培养基包括以下含量的各组分:胰岛素1.5-3μg/mL、转铁蛋白2-3μg/mL、谷氨酰胺1-2mM;AIM-V培养基与RPMI-1640培养基的体积比为1:2-4。

9.一种TIL细胞体外扩增培养方法,其特征在于,包括使用权利要求1-8中任意一项所述的TIL细胞体外扩增培养基组合,所述方法包括:诱导培养:将TIL细胞接种于诱导培养基中培养2-4天获得诱导培养细胞;

增殖培养:将所述诱导培养细胞接种于增殖培养基中培养7-12天获得增殖培养细胞;

活化适应:将所述增殖培养细胞接种于活化适应培养基中培养0.5-1.5天。

10.根据权利要求9所述的培养方法,其特征在于,所述诱导培养、增殖培养和活化适应在免疫细胞体外扩增装置中进行,所述装置包括细胞培养袋(1)和承载所述细胞培养袋(1)的承载台(3),该装置还包括容纳于所述细胞培养袋(1)中的磁性浮球(2)以及在悬挂于所述细胞培养袋(1)上方并且能够驱动所述磁性浮球(2)在所述细胞培养袋(1)中移动的磁性悬挂驱动器(4),所述磁性悬挂驱动器(4)包括能够吸引所述磁性浮球(2)的磁体片(41)和能够悬挂且驱动所述磁体片(41)在所述细胞培养袋(1)上方移动的悬挂驱动架(42);所述细胞培养袋(1)中充有细胞培养液,述细胞培养液中含有培养基以及待扩增的细胞;所述磁性浮球(2)在浮力和磁力的合力作用下漂浮在培养液液面上;所述磁体片(41)能够在所述细胞培养袋(1)上方往复移动,从而通过磁力的作用,驱动所述磁性浮球(2)在漂浮状态下在培养液液面往复移动,所述磁性浮球(2)在培养液液面以下的部分能够搅拌培养液。