1.开发4对EST-SSR引物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)基因组DNA提取

提取24份樱属植物的DNA，检测DNA的浓度和纯度，依据测得的DNA浓度，用预热的TE溶液将DNA样品溶液稀释后作为模板DNA，-20℃保存备用；

(2)序列来源

登录NCBI，搜索Cerasus，得到EST序列，随机选择其中部分EST序列进行SSR位点查找及其引物设计；

(3)SSR位点查找

利用在线搜索软件SSRIT对步骤(2)所选的EST序列进行SSR位点搜索；

(4)SSR引物设计

根据步骤(3)的搜索结果用Primer5.0和Oligo7软件进行引物设计和评价，将设计出并评估合格的20对SSR引物命名为PC1～PC20；

(5)EST-SSR引物初步筛选

将步骤(4)设计的EST-SSR引物交由专业商业公司合成；利用普通梯度PCR仪对引物进行最适复性温度的筛选；随机选择8种野生樱属植物用于引物以及最适退火温度的筛选，各引物对的最适退火温度通过梯度PCR试验确定；后通过琼脂糖凝胶电泳筛选出有目标条带的引物16对；

(6)EST-SSR引物进一步筛选

在最适退火温度下，对24份樱属植物材料进行PCR扩增，对扩增产物采用6％的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，银染，1/‰，胶干；最终从16对引物中选择出引物4对；

4对EST-SSR引物，其核苷酸序列如下所示：

PC1：F:CACACACACCTTCTCTCTCCTGR:GTTGTTATTGGTCTTGCTGCTG

PC10：F:GGCACAAAAGAGAGGAACTTGTR:AGGGTTACAGCCTCAATACCAA

PC12：F:ATATGGGCTGCGTTTATATTGGR:GATTGCACATGCCTTTGTCTTA

PC17：F:AATTTGCAGAGATGGCTTCCR:CTTCTCCTTGGCTTCTTTTGTC；

所述步骤(6)的PCR反应体系为20μL，其中包括：10μL的2×TaqPCRMasterMix，0.4μL的模板DNA，0.8μL、5μmol·μL-1的引物对×2，8μL的ddH2O；反应程序为94℃预变性5min，然后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30s，48-64℃复性30s，72℃延伸30s，最后72℃延伸

7min，4℃保存。

2.如权利要求1所述的开发4对EST-SSR引物的方法，其特征在于，所述步骤(1)中DNA样品溶液稀释后的浓度为50ng·μL-1。

3.如权利要求1所述的开发4对EST-SSR引物的方法，其特征在于，所述步骤(3)SSR位点搜索标准为：二、三、四、五和六核苷酸的最小重复次数分别为10、6、5、4、3次，EST序列长度大于100bp，SSR起始点位置距离5'和3'不小于20bp。

4.如权利要求1所述的开发4对EST-SSR引物的方法，其特征在于，所述步骤(4)中设计引物时设置的主要参数为：GC含量40％～70％，退火温度50～62℃，引物长18～24bp，上下游引物Tm值之差在1℃范围之内，预期扩增产物长度100～500bp。

5.如权利要求1所述的开发4对EST-SSR引物的方法，其特征在于，所述步骤(5)的PCR反应体系为20μL，其中包括：10μL的2×TaqPCRMasterMix，0.4μL的模板DNA，0.8μL、5μmol·μL-1的引物对×2，8μL的ddH2O；反应程序为94℃预变性5min，然后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30s，48-64℃复性30s，72℃延伸30s，最后72℃延伸10min，4℃保存。

6.如权利要求1中所述的4对EST-SSR引物在樱属植物指纹图谱构建中的应用。