利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2016110467527
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-27
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种苹果酸酶重组菌的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)对来源于拟南芥的NADP依赖型苹果酸酶基因NADP-ME2编码的氨基酸在E129V、E129D、S209V、I407Y、A487S、A487Y或C490S处进行突变,得到苹果酸酶突变基因;

(2)将所述苹果酸酶突变基因与载体连接,然后在宿主菌中表达,得到苹果酸酶重组菌。

2.根据权利要求1所述的苹果酸酶重组菌的构建方法,其特征在于:在步骤(2)中,所述载体为pTrc系列质粒、pET系列质粒、pQE系列质粒或PY系列质粒。

3.根据权利要求1所述的苹果酸酶重组菌的构建方法,其特征在于:在步骤(2)中,所述宿主菌为大肠杆菌或酵母菌。

4.一种由权利要求1-3中任一项方法构建的苹果酸酶重组菌。

5.一种如权利要求1-3中任一项所述的苹果酸酶重组菌生产L-苹果酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将所述苹果酸酶重组菌在发酵培养基中进行好氧发酵;

(2)当所述苹果酸酶重组菌生长至OD600为0.4-0.8时,进行诱导,然后再进行微好氧发酵。

6.根据权利要求5所述的生产L-苹果酸的方法,其特征在于:每升所述发酵培养基的成分包括:20-50g葡萄糖,10-30g蛋白胨,5-20g酵母提取物,5-20g KHCO3,2-5g(NH4)2HPO4·

12H2O,0.5-2g NH4H2PO4,0.1-1g KCl,0.1-1g MgSO4·7H2O,1-3mL微量元素液,余量为水。

7.根据权利要求5所述的生产L-苹果酸的方法,其特征在于:在步骤(1)中,在25-37℃下,200-300r/min转速的条件下进行好氧发酵。

8.根据权利要求5所述的生产L-苹果酸的方法,其特征在于:在步骤(1)中,使用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷或乳糖进行诱导。

9.根据权利要求5所述的生产L-苹果酸的方法,其特征在于:在步骤(2)中,在25-37℃下,低于50r/min转速的条件下进行微好氧发酵。