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专利号: 2016108500550
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种靶向打靶载体,其特征在于,所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示,命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。

2.如权利要求1所述靶向打靶载体的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

(1)构建空载体mpNTKV-LoxP,所述空载体mpNTKV-LoxP序列如SEQ ID NO.17所示;

(2)以bMQ-369E5 BAC DNA为模板,利用序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物进行PCR,扩增出序列如SEQ ID NO.1所示的左侧同源臂;以bMQ-369E5 BAC DNA为模板,利用序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物进行PCR,扩增出序列如SEQ ID NO.2所示的右侧同源臂;

(3)将左侧同源臂和右侧同源臂插入空载体mpNTKV-LoxP中,即得靶向打靶载体mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。

3.如权利要求1所述靶向打靶载体在靶向整合外源基因至MYH9 Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株中的应用。

4.一种靶向整合外源基因至MYH9 Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法,其特征在于,所述方法是先将构建的外源基因表达盒插入权利要求1所述的靶向打靶载体中左侧同源臂和抗性基因Neomycin之间以构建靶向整合外源基因的打靶载体,再将靶向整合外源基因的打靶载体导入小鼠胚胎干细胞构建小鼠胚胎干细胞株。

5.整合外源基因的打靶载体,其特征在于,所述整合外源基因的打靶载体是将构建的外源基因表达盒插入权利要求1所述的靶向打靶载体中左侧同源臂和抗性基因Neomycin之间而构建成的。

6.如权利要求5所述的整合外源基因的打靶载体,其特征在于,所述整合外源基因的打靶载体序列如SEQ ID NO.8所示,命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-EF1α-GFP-pA-MAI2R载体;或者,所述整合外源基因的打靶载体序列如SEQ ID NO.9所示,命名为mpNTKV-LoxP MAI2LpA-GFP-EF1α-MAI2R载体;或者,所述整合外源基因的打靶载体序列如SEQ ID NO.10所示,命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-αMHC-Puro-IRES-GFP-pA-MAI2R载体。