1.一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:(1)构建mpNTKV-LoxP载体,所述mpNTKV-LoxP载体序列如SEQ ID NO.4所示;
(2)在mpNTKV-LoxP载体基础上构建靶向MYH9基因的打靶载体:将小鼠MYH9基因外显子
2上游4.0kb和下游1.7kkb DNA序列分别插入mpNTKV-LoxP载体中获得靶向MYH9基因的打靶载体,命名为mpNTKV-LoxP MAL-MAR靶向载体,所述mpNTKV-LoxP MAL-MAR靶向载体序列如SEQ ID NO.25所示;
(3)将拟替代内源MYH9基因的编码融合荧光蛋白的非肌性肌球蛋白重链II的cDNA分别插入靶向MYH9基因打靶载体中从而获得三个不同的MYH9基因替代打靶载体,所述不同的的MYH9基因替代打靶载体分别命名为打靶载体1、打靶载体2、打靶载体3;所述打靶载体1的序列如SEQ ID NO.26所示、所述打靶载体2的序列如SEQ ID NO.27所示、所述打靶载体3的序列如SEQ ID NO.28所示;
(4)将构建的MYH9基因替代打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中,经药物筛选得到细胞单克隆,经Southern Blot或PCR鉴定细胞单克隆,进而获得MYH9基因替代ES细胞系,所述MYH9基因替代ES细胞系用于产生MYH9基因替代小鼠。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中所述药物筛选是经G418和Ganciclovir药物筛选。
3.一种新载体,其特征在于,所述载体序列如SEQ ID NO.4所示,命名为mpNTKV-LoxP载体。
4.一种靶向载体,其特征在于,所述靶向载体序列如SEQ ID NO.25所示,命名为mpNTKV-LoxP MAL-MAR靶向载体。