1.一种石灰性紫色土磷素分级方法,其特征在于:本方法先采集石灰性紫色土壤样品风干过100目筛,然后采用化学提取剂逐级提取,即利用不同的化学试剂逐级提取该土壤样品中有机磷和无机磷组分,具体步骤如下:
1)采用去离子水提取土壤样品中水溶性磷H2O-P,包括水溶性有机磷H2O-Po和水溶性无机磷H2O-Pi;
2)在步骤1)提取后的土壤样品中再采用阴离子交换树脂提取土壤样品中易转化性磷,即树脂溶性磷Resin-P,包括树脂溶性有机磷Resin-Po和树脂溶性无机磷Resin-Pi;
3)在步骤2)提取后的土壤样品中再采用碳酸氢钠NaHCO3、醋酸铵NH4OAC、氟化铵NH4F提取土壤样品中活性磷,主要包括活性有机磷La-P、二钙型磷酸盐Ca2-P、八钙型磷酸盐Ca8-P和铝型磷酸盐Al-P;同时采用氯仿CHCl3提取微生物量磷SM-P;
4)在步骤3)提取后的土壤样品中再采用氢氧化钠NaOH和柠檬酸钠Na3C6H5O7提取土壤样品中缓性磷,主要包括缓性有机磷Sl-P、铁型磷Fe-P和闭蓄态磷O-P;
5)在步骤4)提取后的土壤样品中再采用HCl和超声波提取土壤样品中慢性有机磷Ch-P、团聚体内有机磷Sonic- Po和无机磷Sonic- Pi,并计算土壤中稳性有机磷St-P;
6)在步骤5)提取后的土壤样品中再采用ICP法提取残留态磷Re-P。
2.根据权利要求1所述的石灰性紫色土磷素分级方法,其特征在于:所述各步骤具体为,
(1)称取通过100目的土样1.0000g,置于100ml离心管中,加入50ml去离子水,于20-25℃下振荡1h,在3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中水溶性无机磷H2O-Pi,ICP法测定滤液中总磷Pt1,水溶性有机磷H2O-Po则采用差减法,即H2O-Po= Pt1-(H2O-Pi);步骤(1)构成权利要求1的步骤1);
(2)加入2gNaCl饱和阴离子交换树脂和50ml去离子水于上述离心管中,20-25℃下连续振荡16h,将悬浊液倾至装有80目筛的100ml烧杯中,用少量水洗去土粒,使筛上仅保留树脂;用25ml 0.7M NaCl溶液转移筛上树脂于50ml烧杯中,将烧杯放在电热板上45min,冷却后,将溶液过滤到50ml容量瓶,并用0.7M NaCl溶液定容;吸取40ml上述溶液分别用钼锑抗比色法测定滤液中树脂溶性无机磷Resin-Pi,ICP法测定滤液中总磷Pt2,树脂溶性有机磷Resin-Po则采用差减法,即Resin-Po= Pt2-(Resin-Pi);步骤(2)构成权利要求1的步骤2);
(3)将上述100ml烧杯中的悬浊液转移至100ml离心管中,转速3500 r·min下离心
8min,弃去上清液,将土壤残渣平均分为B1和B2两组,向土壤残渣B2中加入50ml 0.5M NaHCO3溶液,20-25℃下振荡1h,转速3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到50ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中Ca2-Pi,ICP法测定滤液中总磷Pt3,NaHCO3-Po则采用差减法,即NaHCO3-Po= Pt3-(Ca2-Pi);
将土壤残渣B1转移至100ml烧杯中,放入干燥器中,同时放入装有30ml 1M NaOH溶液和
30ml 无乙醇氯仿的小烧杯,用少量凡士林密封干燥器,用真空泵抽气至氯仿沸腾并保持至少 2 min,关闭干燥器的阀门,在25℃的黑暗条件下放置 24h后,将烧杯中土壤全部转移到
100ml离心管中,加入50ml 0. 5M NaHCO3溶液,20-25℃下振荡1h,转速3500 r·min下离心
8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗法测定滤液中CHCl3/NaHCO3-P,微生物量磷(SM-P)则为:SM-P=(CHCl3/NaHCO3-P)-(Ca2-Pi);
(4)将经CHCl3/ NaHCO3浸提后土壤残渣B1用950ml·L-1的酒精清洗两次,弃去清液;然后加入50ml 0.5M NH4OAC, 20-25℃下振荡1h,3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中Ca8-P,ICP法测定滤液中总磷Pt4,NH4OAC-Po则采用差减法,即NH4OAC-Po= Pt4-(Ca8-P);
(5)将步骤(4)浸提后土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次,弃去清液,然后加入50ml
0.5M NH4F, 20-25℃下振荡1h,3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到
100ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中Al-P,ICP法测定滤液中总磷Pt5,NH4F -Po则采用差减法,即NH4F -Po= Pt5-(Al-P),则活性有机磷(La-P)为:La-P=NH4OAC-Po+NH4F -Po+NaHCO3-Po;步骤(3)-(5)构成权利要求1的步骤3);
(6) 将NH4F浸提后土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次,弃去清液;然后加入50ml 0.1M NaOH, 20-25℃下振荡1h,3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中Fe-P,ICP法测定滤液中总磷Pt6-1,NaOH -Po则采用差减法,即NaOH -Po= Pt6-1-(Fe-P);同时吸取25ml滤液于50ml离心管中,加入HCl调节pH为1.0-
1.8, 静置过夜,通过无磷滤纸过滤到50ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中NaOH/HCl-Pi,ICP法测定滤液中总磷Pt6-2,NaOH/HCl -Po则采用差减法,即NaOH/HCl -Po= Pt6-2-(NaOH/HCl-Pi);
(7)将NaOH浸提后的土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次,弃去清液;然后加入50ml
0.3M Na3C6H5O7, 20-25℃下振荡1h,3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中O-P,ICP法测定滤液中总磷Pt7,Na3C6H5O7 -Po则采用差减法,即Na3C6H5O7 -Po= Pt7-(O-P);土壤中缓性有机磷Sl-P则为:Sl-P=NaOH/HCl -Po+Na3C6H5O7 -Po;步骤(6)-(7)构成权利要求1的步骤4);
(8)将Na3C6H5O7浸提后的土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次,弃去清液;然后加入20ml
0.1M NaOH溶液放在超声波分散仪进行分散,分散后的土壤残渣加入30ml 0.1M NaOH溶液,
20-25℃下振荡1h,3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗比色法测定滤液中Sonic-Pi,ICP法测定滤液中总磷Pt8,Sonic -Po则采用差减法,即Sonic -Po= Pt8-(Sonic-Pi);
(9)将步骤(8)浸提后土壤残渣加入50ml 1M HCl, 20-25℃下振荡1h,3500 r·min下离心8min,上层清液通过无磷滤纸过滤到100ml三角瓶中,用钼锑抗法测定滤液中HCl-Pi,ICP法测定滤液中总磷Pt9,HCl -Po则采用差减法,即HCl -Po= Pt9-(HCl-Pi);步骤(8)-(9)构成权利要求1的步骤5);
(10)将上述土壤残渣用ICP法测定残留态磷(Re-P);步骤(10)构成权利要求1的步骤
6)。