1.一种操作方便的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中的应用,其特征是:将细胞接种于载玻片式培养皿中进行细胞爬片,细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定;所述载玻片式培养皿设有培养皿体和皿盖,培养皿体型号分单孔室和多孔室两种;各孔室面积大于载玻片,皿体底直接作为载玻片使用,皿体底外侧面设有与载玻片尺寸对应的长方形框痕线凹沟,在外力作用下可将皿体的底部沿长方形框痕线凹沟脱出,获得有培养细胞面形同载玻片的皿底,备用于各种免疫组织化学检测;
所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下列步骤:
(1)用冰丙酮固定 15 min或4%多聚甲醛固定;
(2)流水漂洗,用PBS清洗标本 3次;
(3)用 0.5%Triton X-100孵育 10 min;
(4)0.3%H2O2孵育10 min;
(5)用PBS清洗标本 3次后,热风充分干燥 ;
(7)用免疫组化笔将油墨在细胞爬片上画分2-20个分隔染色区;
(8)空气充分干燥;
(9) 用正常二抗血清封闭孵育10 min;
(10)在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30~60 min;
(11) 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次;
(12)滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30~60 min;
(13)PBS清洗标本3次;
(14)DAB显色,避光,镜下观察;
(15)蒸馏水洗;
(16)苏木素衬染 ;
(17)盐酸酒精分化,自来水洗;
(18)水性封固剂封片;
所述免疫组化笔包括笔筒,笔筒内设置海绵样的圆柱体笔芯,笔筒内灌注有油墨,海绵样的圆柱体笔芯前端设置木质笔芯;海绵样的圆柱体笔芯放置在笔筒中,笔筒为长方体或圆柱体,笔筒口外侧有螺纹与内笔帽的内螺纹匹配吻合;笔筒中放置不锈钢珠一个,摇晃笔筒时作搅和油墨的作用;所述内笔帽起封闭笔筒口,防止油墨挥发保持其液相状态和联接外笔帽的作用,其内表面有与笔筒口吻合的内螺纹,可旋盖笔筒口,内笔帽的外表面设有与外笔帽内口缘匹配吻合的锁口凹,圆柱体笔芯末端一侧设有油墨刷;外笔帽的内口缘周设有锁口凸,与内笔帽的锁口凹匹配吻合,起封闭内笔帽和固定内笔帽为一体开启笔筒口,并起提出油墨刷的作用。
2.根据权利要求1所述的操作方便的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中的应用,其特征是:在外力作用下可将皿体的底部沿长方形框痕线凹沟脱出前,先用锐利刀具沿线凹沟划、勾,然后在皿底面稍加用外力可将皿体的单孔槽底脱出。
3.根据权利要求1或2所述的操作方便的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中的应用,其特征是:多孔室培养皿的一个角呈斜面形式,方便方位标识。
4.根据权利要求3所述的操作方便的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中的应用,其特征是:培养皿盖的一个角呈与培养皿呈斜面的角配合的斜面形式;培养皿盖与培养皿吻合口周缘的交错深度≥10mm。