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专利号: 2015109671260
申请人: 中国水稻研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-04-20
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一组水稻温敏核不育基因tms5的功能特异性分子标记引物,其特征在于该功能特异性分子标记引物选自以下 3 组引物之一:dtms51/PvuI 的上游引物序列为 5’- CATCGTGCTTCGTGCCAAAACGG-3’;

下游引物序列5’-TCGACGGTGAGGGGCGGCGCGATC -3’;

dtms52/BsiWI 的 上 游 引 物 序 列 为5’-CCCATCGTGCTTCGTGCCAAAAC-3’;

下游引物序列 5’- TCGACGGTGAGGGGCGGCGCGTAC-3’;

dtms53/Hpy99I 的 上 游 引 物 序 列 为5’-CGGCCCGGCCCATCGTGCTTCGT-3’;

下游引物序列 5’-TCGACGGTGAGGGGCGGCGCCGTC-3’。

2.一种采用权利要求 1所述的特异性标记引物检测水稻温敏核不育基因tms5 的方法,其特征在于该方法包括如下步骤:提取待测水稻标本基因组 DNA 作为模板,利用 3 对引物中任意一对特异性标记引物对水稻样品 DNA 进行扩增,再对 PCR 产物用限制性内切酶进行酶切后电泳, PCR 产物源于正常可育的 TMS5 基因可以被酶切,而扩增产物源于高温不育的 tms5 基因不能被酶切,所以tms51/PvuI扩增产物酶切后电泳谱带为可育材料 

142bp,携有 tms5 基因的温敏核不育系谱带165bp;dtms52/BsiWI 扩增产物酶切后电泳谱带为可育材料 147bp,携有 tms5基因的温敏核不育系 167bp;dtms53/Hpy99I 扩增产物酶切后电泳谱带为可育材料 150bp,携有 tms5 基因的温敏核不育系 169bp;杂交稻水稻材料则会扩增出不育和可育的两条谱带。

3.根据权利要求 2 所述的方法,其特征在于:所述的特异性标记引物的 PCR扩增采用如下体系:pH 8.8 的 Tris-HCl 33.5 mM,(NH4)2SO4 8.0 mM,MgCl2 1.5 mM,TWEEN-20 

0.05%,dNTPs 0.2 mM,上、下游引物各 3.3 ng/µl,Taq DNA聚合酶2.0单位,模版DNA 50 ng。

4.根据权利要求 2 所述的方法,其特征在于:PCR 反应条件具体参数为:94℃ 2 分钟;94℃ 45 秒、63℃45 秒、72℃ 1 分钟,30 个循环;72℃ 8分钟。

5.根据权利要求 2 所述的方法,其特征在于:特异性标记引物的 PCR 产物的酶切反应条件为:反应体系为 10µl 的 PCR 产物,3.0 单位的内切酶,1.5µl的10×Buffer,加 ddH2O 至 15µl,反应条件:PvuI 和 Hpy99I 限制性内切酶 37℃,3 小时;BsiWI 为 55℃,

3 小时。