1.一种可皆霉素制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)菌种活化:将狭旋毛壳菌种接种到平板培养基上,25℃恒温培养72小时,获得活化菌种;
(2)制备种子液:将步骤(1)中得到的活化菌种接种到装有无菌培养液A的无菌三角瓶中,转速为150rpm,温度为25℃条件下震荡培养72小时,获得种子液;
培养液A的配方为:胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠10g/L,pH 6.0±0.1;
(3)发酵培养:将步骤(2)制备的种子液与培养液B按照体积比为5:100接入到无菌三角瓶中,转速为150rpm,温度为25℃条件下震荡培养7d,获得发酵液;
培养液B的配方为:葡萄糖40 g/L,蛋白胨 10 g/L,酵母粉 10 g/L,pH6.0±0.1;
(4)乙酸乙酯提取物的制备:将步骤(3)制备的发酵液用医用纱布过滤,得到狭旋毛壳菌体,将狭旋毛壳菌体用乙酸乙酯提取,得到乙酸乙酯提取液,31 33℃下减压除去乙酸乙~酯后得到乙酸乙酯提取物;
(5)可皆霉素的制备:将步骤(4)制备的乙酸乙酯提取物用80~100目硅胶拌样后装柱,固定相为200 300目硅胶,以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱,硅胶薄层层析检测,合并二氯甲烷-~甲醇的体积比为100:(2 4)的流份,31 33℃下减压除去二氯甲烷和甲醇,得可皆霉素。
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2.如权利要求1所述可皆霉素制备方法,其特征在于,步骤(1)中平板培养基配方为:酵母膏10 g/L,葡萄糖40 g/L,蛋白胨10 g/L,琼脂粉20 g/L,pH6.0±0.1。
3.如权利要求1中所述可皆霉素制备方法,其特征在于,步骤(4)中将狭旋毛壳菌体用乙酸乙酯提取时,用乙酸乙酯提取3次,每次提取时于20 25℃冷浸10小时,每次提取时狭旋~毛壳菌体与乙酸乙酯的固液比为1g︰30ml。
4.如权利要求1中所述可皆霉素制备方法,其特征在于,步骤(5)中将乙酸乙酯提取物与80~100目硅胶拌样时,乙酸乙酯提取物与80~100目硅胶的重量比为1︰2。
5.如权利要求1中所述可皆霉素制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述狭旋毛壳菌采用美国模式培养物集存库所保藏的编号为ATCC NO. 56725的菌株2。