1.一种鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的试剂盒,与流式细胞仪配套使用,其特征在于所述试剂盒配备针对下述物质的单克隆抗体:Ig κ Light Chain/ Ig λ Light Chain、CD19、CD117、CD138、CD56、CD38和CD45,并依次按照下述顺序依次进行荧光素标记:FITC/PE、PE-Cy5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、V450和V500。
2.根据权利要求1所述的鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的试剂盒,其特征在于还包括固定/破膜剂和溶红细胞液。
3.权利要求1所述的试剂盒在制备鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的产品中的应用,其特征在于所述应用包括:将所述试剂盒中针对CD19、CD117、CD138、CD56、CD38和CD45的单克隆抗体加入至同一个装有骨髓标本的试管中;经溶红细胞、破膜处理后,加入试剂盒中针对Ig κ Light Chain/ Ig λ Light Chain的单克隆抗体,制成待测试样;将待测试样经流式细胞仪检测,设门分析如下:①建立FSC/SSC密度图,将有核细胞区域划为R1;对R1细胞显示CD38/CD138散点图,+ +将CD38CD138细胞划为R2;建立FSC/SSC散点图只显示R2门内细胞,将均一分布的细胞划为R3;
②将R3门内细胞分别建立CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117二维散点图,进一步对二维散点图内集中分布的细胞设门,标记为R4和/或R5;
③对应CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117中R4和/或R5门内细胞分别依次建立CD45/CD117、CD56/CD117和CD45/CD56的二维散点图;
④对应CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117中R4和/或R5门内细胞分别依次建立Ig κ Light Chain/ Ig λ Light Chain二维点图,分析Ig κ Light Chain和Ig λ Light Chain的表达及其比值。
4.根据权利要求3所述的试剂盒在制备鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的产品中的应用,其特征在于待测试样的处理包括以下步骤:①洗涤细胞:用1×PBS缓冲液充分离心洗涤骨髓标本;
②标记抗体:将洗涤后的骨髓标本与CD19-PE-Cy5 2.5μL,CD117- PE-Cy7 2.5μL,CD138- APC 5uL, CD56 -APC-Cy7 2.5μL,CD38-V450 2.5μL 和CD45-V500 3μL混匀,室温避光孵育10~20分钟;
③溶红细胞:向步骤②的体系中加入红细胞溶解液,混匀后避光,室温放置5~10分钟,溶解红细胞;
④破膜处理:1500转/分离心8分钟,弃上清液,加入固定/破膜剂中的细胞固定液
100μL,震荡混匀,避光孵育15min;
加入500μL 1×PBS缓冲液,混匀,1500转/分离心8分钟,弃上清液,加入固定/破膜剂中的破膜液100μL,混匀,并同时加入10μL的Ig κ Light Chain- FITC / Ig λ Light Chain-PE,避光孵育15min;
⑤洗涤细胞:加入2mL含0.5vol.%~2vol.%血清和0.1wt.% NaN3的1×PBS,混匀,1500转/分离心8分钟,弃上清液,加入300μL 1×PBS缓冲液,混匀、待测。