1.一种竹蛏活性八肽,其氨基酸序列为:Ala-Pro-His-Asp-Asp-Gln-Asn-His,ESI/MS检测分子量为933.1Da。
2.一种如权利要求1所述的竹蛏活性八肽的制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1)新鲜竹蛏去壳取肉,竹蛏肉洗净后捣碎,按料液比1:1~3加水进行组织匀浆,匀浆后调节匀浆液pH值为8~10.4备用;
(2)在上述匀浆液中加入碱性蛋白酶进行酶解,获取酶解样品,酶解温度为35~50℃,加酶量为300~1200U/g竹蛏肉,酶解时间为2~8h,酶解完成后于95~100℃、10~15min进行灭酶;
(3)将上述酶解样品过5KD、8KD超滤膜进行超滤,分别收集分子量大于8KD、分子量为
8~5KD以及分子量小于5KD的酶解液组进行冷冻干燥;
(4)将步骤(3)中的各分子量段的酶解液组分别利用MTT法进行抗肿瘤活性检测,取抗肿瘤活性最高的酶解液组进行G-25凝胶分离,收集相应的洗脱峰;
(5)对步骤(4)中收集的洗脱峰进行反相高效液相色谱纯化,收集各峰组分并进行氨基酸测序,获得所述竹蛏活性八肽。
3.如权利要求2所述的竹蛏活性八肽的制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1)新鲜竹蛏去壳取肉,洗净后捣碎,按料液比1:1加水进行组织匀浆,匀浆后调节匀浆液pH值为9.6备用;
(2)在上述匀浆液中加入碱性蛋白酶进行酶解,获得酶解样品,酶解温度为50℃,加酶量为300U/g竹蛏肉,酶解时间为8h,酶解完成后于95~100℃、10~15min进行灭酶;
(3)将上述酶解样品过5KD超滤膜进行超滤,收集分子量小于5KD的酶解液进行冷冻干燥;
(4)对步骤(3)中收集的酶解液进行G-25凝胶分离,收集洗脱峰1;
(5)对步骤(4)中收集的洗脱峰1进行反相高效液相色谱纯化,收集各峰组分并进行氨基酸测序,获得所述竹蛏活性八肽;
前述反相高效液相色谱条件为:Zorbax SB-C18色谱柱4.6×250mm 5um,检测波长
280nm/214nm,柱温为20℃,进样量为100ul,梯度洗脱,流速为1.0ml/min,流动相A为
0.06%TFA,B为0.05%TFA的乙腈,洗脱程序:0%~0%B洗脱4分钟,0%~7%B洗脱
25分钟,7%~100%B洗脱1分钟,100%~100%B洗脱5分钟。
4.一种如权利要求1所述的竹蛏活性八肽在制备抗肿瘤药物和食品中的应用。
5.如权利要求4所述的竹蛏活性八肽在制备抗肿瘤药物和食品中的应用,其特征在于:所述抗肿瘤为抑制肿瘤细胞的增殖活性,所述肿瘤为人前列腺癌。
6.如权利要求5所述的竹蛏活性八肽在制备抗肿瘤药物和食品中的应用,其特征在于:所述竹蛏活性八肽对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制率与浓度和作用时间呈依赖关系。