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专利号: 2015100676998
申请人: 吉首大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-12-10
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取:首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末,以料液比1:5-25,单位比例为g/mL,加入pH调节为1.5-7.5的水,加入石蒜属植物粉末质量1%-5%的酶,在40-80℃酶解

0.5-2.5h,离心20min,过滤,取上清液,即得石蒜碱提取液;

(2)纯化

①溶剂萃取:将步骤(1)提取的石蒜碱提取液用NaOH调节pH至10,按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷,摇匀,静置过夜,取下层氯仿相,HCl调节pH至2,抽滤,得石蒜碱萃取浓缩液;

②阳离子交换树脂吸附:将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1~6用D-001型阳离子交换树脂,以上样速率1-3BV/h上样至饱和,用含0.5-2.5mol/L氨水的40%-80%乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱,干燥,得干燥物Ⅰ;

③C18反相硅胶柱层析:C18填料预处理,将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中,然后以流动相溶解层析出来的层析物,上样,采用甲醇-水溶液分次洗脱,收集洗脱液,浓缩,真空冷冻干燥,得干燥物Ⅱ;

④正相硅胶柱层析:用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶以柱直径-柱高湿法装柱,所述柱直径-柱高的比例为1:10~30,步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀,加入洗脱剂溶解,所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合;蒸发溶剂后干法上样,洗脱,收集洗脱液,浓缩,真空冷冻干燥,得干燥物Ⅲ;

⑤重结晶:将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解,再结晶得到石蒜碱粗品,过滤,在50~

60℃真空干燥得石蒜碱。

2.根据权利要求1所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末,以料液比1:10-25,单位比例为g/mL,加入pH调节为3-6的水,加入石蒜属植物粉末质量2-5%的酶,在35-65℃酶解

1-2h,离心20min,过滤,取上清液,即得石蒜碱提取液。

3.根据权利要求2所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取:首先称取经烘干、粉碎、过筛处理的石蒜属植物粉末,以料液比1:10,单位比例为g/mL,加入pH调节为4.5的水,加入石蒜属植物粉末质量4%的酶,在50℃酶解

1.5h,离心20min,过滤,取上清液,即得石蒜碱提取液;

(2)纯化:

①溶剂萃取:将步骤(1)提取的石蒜碱提取液用NaOH调节pH至10,按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷,摇匀,静置过夜,取下层氯仿相,HCl调节pH至2,抽滤,得石蒜碱萃取浓缩液;

②阳离子交换树脂吸附:将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至2,用D-001型阳离子交换树脂,以上样速率3BV/h上样至饱和,用含1.5mol/L氨水的70%乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱,干燥,得干燥物Ⅰ;

③C18反相硅胶柱层析:C18填料预处理,将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中,然后以流动相溶解层析出来的层析物,上样,采用甲醇-水溶液分次洗脱,收集洗脱液,浓缩,真空冷冻干燥,得干燥物Ⅱ;

④正相硅胶柱层析:用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶以柱直径-柱高湿法装柱,所述柱直径-柱高的比例为1:10,步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀,加入洗脱剂溶解,所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合;

蒸发溶剂后干法上样,洗脱,收集洗脱液,浓缩,真空冷冻干燥,得干燥物Ⅲ;

⑤重结晶:将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解,再结晶得到石蒜碱粗品,过滤,在50~

60℃真空干燥得石蒜碱。

4.根据权利要求1-3任一项所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述酶为纤维素酶与半纤维素酶的混合酶,纤维素酶与果胶酶的混合酶,半纤维素酶与果胶酶的混合酶,纤维素酶、半纤维素酶及果胶酶的混合酶中的一种。

5.根据权利要求4所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述纤维素酶与果胶酶的混合酶,所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1。

6.根据权利要求1所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述步骤④中,洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯,所述乙酸乙酯与石油醚的体积比为8.4:1.6。

7.根据权利要求1-3任一项所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述石蒜属植物为忽地笑、红花石蒜、玫瑰石蒜、稻草石蒜或中国石蒜。

8.根据权利要求7所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述石蒜属植物为忽地笑。

9.根据权利要求1或2所述的从石蒜属植物中提取石蒜碱的方法,其特征在于,所述石蒜属植物粉末为鳞茎或花粉末。