1.一种植物原生质体中液泡内、外硝态氮含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)植物细胞原生质体的提取：取幼苗叶片，加入预冷的研磨缓冲液研磨，研磨液经过滤、离心，得到的沉淀即为原生质体，用悬浮缓冲液悬浮后得原生质体悬浮液，分为两等分，其中一份用于硝态氮含量的检测，另一份用于提取液泡；其中所述研磨缓冲液pH为7.6，包括23～27mmol·L-1 4-羟乙基哌嗪乙磺酸-缓血酸胺，200～300mmol·L-1甘露醇，4～

7mmol·L-1乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸,3～6mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠，8～-1 -1 -1 -1

15mmol·L KCl,1～3mmol·L 苯甲基磺酰氟，5-20mg·L 聚乙烯吡咯烷酮，3～7mg·L 牛血清白蛋白，3～6μg·L-1 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚，4～7mmol·L-1K2S2O5，0.8～

1.2mmol·L-1二硫苏糖醇，所述二硫苏糖醇在所述研磨缓冲液使用前加入；所述悬浮缓冲液pH为7.6，包括2.3～2.8mmol·L-1 4-羟乙基哌嗪乙磺酸-缓血酸胺，200～300mmol·L-1甘-1 -1露醇，0.8～1.2mmol·L 乙二胺四乙酸二钠，0.9～1.1mmol·L 二硫苏糖醇，所述二硫苏糖醇在所述悬浮缓冲液使用前加入；

(2)植物细胞原生质体中液泡的提取：取上述用于提取液泡的原生质体悬浮液，加入至蔗糖溶液中，采用蔗糖密度梯度离心法离心，用移液枪吸取离心液中从上往下数的第二层溶液，即得到植物液泡；其中所述蔗糖密度梯度离心法的步骤包括：将悬浮液置于不连续蔗糖梯度：45％、36％、22％的蔗糖溶液中，经70000×g离心2h，取22％和36％区带，再加入悬浮液，经80000×g离心40min；

(3)原生质体中液泡内、外硝态氮含量的测定：在光镜下检测上述液泡中叶绿素的含量和细胞色素c氧化酶的活性，以确定提取液泡的纯度，并且测定提取液泡中硝态氮的含量，最后分别测定原生质体和液泡中酸性磷酸酶的活性，并将原生质体和液泡中硝态氮的含量用酸性磷酸酶的活性标准化，经计算得到原生质体中液泡内、外硝态氮的含量；其中所述植物为油菜或烟草。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)～(3)的整个过程在0～4℃下进行。

3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述过滤是用两层纱布过滤。

4.如权利要求1～3任一项所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中离心的具体操作为：经560×g离心12min，然后将上清液经10000×g离心15min，取上清液，经60000×g离心30min，弃上清液。