1.一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法,其特征在于具体步骤如下:
步骤(1)培养液的准备
培养液成分:Ca(NO3)2 0.4份,NaH2PO4 0.1份,MgSO4·7H2O 0.05份,CuSO4·5H2O 0.02份,MnCl2·4H2O 0.1份,FeSO4·7H2O 0.04份,尿素0.5份,人尿1份,泛酸钙0.03份,麦饭石粉0.04份,α-萘乙酸0.002份,肌醇0.001份,叶酸0.004份,尼古丁酸0.001份,维生素H 0.008份,EDTA 0.04份,土壤浸出液1.2份,冷开水1000份;装入棕色磨口塞试剂瓶中,摇匀,密封,置入4℃冰箱保存备用;
步骤(2)三角烧瓶培养
取一3000毫升三角烧瓶,加入1500毫升步骤1所述培养液,选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的雨生红球藻藻种接种,接种要在上午9-10点进行,接种密度4万个细胞/每毫升,轻轻摇匀,报纸和橡皮筋封口,放在微藻培养室中进行培养,空调控温,日光灯管提供光照,不充气,调节温度至26℃,光照强度至5000lux,光暗周期=12h/L+12h/D,即提供间歇光,12小时光照,12小时黑暗,每天手动摇瓶3次,每次45秒钟,连续培养7天,转入下一步骤;
步骤(3)白塑料桶培养
取一65升带盖的大口白塑料桶(市场有售),加入步骤1所述培养液40升,再加入步骤2所述藻液1800毫升,轻轻摇动3分钟,盖上盖子,进行培养。盖子上打上2个孔,每个孔直径10毫米,插入2根管子,一根为塑料管,长3米,直径8毫米,一端连接空气压缩机,另一端插入到藻液底部,用以充气,充入混合气体,气体成分=空气98%+纯CO22%,连续不间断充气,气量不宜太大,以让藻细胞浮起不下沉即可;另一根较短,长30厘米,直径10毫米,为比较硬的料管,用以排气;将此塑料桶放入微藻培养室中培养,室内空调控温,日光灯管照明,以打开灯管的数量多少来控制光照强度,提供连续不间断光照,连续培养8天,前4天调节温度至28℃,光照强度18000lux(因塑料桶壁的阻挡和吸收作用,到达藻液的实际光照强度约为12000lux),后4天,调节温度至30℃,光照强度20000lux,后转入下一步骤;
步骤(4)藻细胞收集
取步骤3所述藻液1000份,加入0.5份甲壳素,充分搅拌15分钟,再加入0.8份明矾,搅拌20分钟,静置、沉淀36小时,弃上清液,取底部红色藻泥,藻细胞收集完毕。