利索能及
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专利号: 2014106802190
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法,其特征在于具体步骤如下:

步骤(1)培养液的准备

培养液成分:Ca(NO3)20.4份,NaH2PO40.1份,MgSO4·7H2O 0.05份,CuSO4·5H2O 0.02份,MnCl2·4H2O 0.1份,FeSO4·7H2O 0.04份,尿素0.5份,人尿1份,泛酸钙0.03份,麦饭石粉

0.04份,α-萘乙酸0.002份,肌醇0.001份,叶酸0.004份,尼古丁酸0.001份,维生素H 0.008份,EDTA 0.04份,土壤浸出液1.2份,冷开水1000份;装入棕色磨口塞试剂瓶中,摇匀,密封,置入4℃冰箱保存备用;

步骤(2)三角烧瓶培养

取一3000毫升三角烧瓶,加入1500毫升步骤1所述培养液,选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的雨生红球藻藻种接种,接种要在上午9-10点进行,接种密度4万个细胞/每毫升,轻轻摇匀,报纸和橡皮筋封口,放在微藻培养室中进行培养,空调控温,日光灯管提供光照,不充气,调节温度至26℃,光照强度至5000lux,光暗周期=12h/L+12h/D,即提供间歇光,12小时光照,12小时黑暗,每天手动摇瓶3次,每次45秒钟,连续培养7天,转入下一步骤;

步骤(3)白塑料桶培养

取一65升带盖的大口白塑料桶,市场有售,加入步骤1所述培养液40升,再加入步骤2连续培养7天的藻液1800毫升,轻轻摇动3分钟,盖上盖子,进行培养;盖子上打上2个孔,每个孔直径10毫米,插入2根管子,一根为塑料管,长3米,直径8毫米,一端连接空气压缩机,另一端插入到藻液底部,用以充气,充入混合气体,气体成分=空气98%+纯CO22%,连续不间断充气,气量不宜太大,以让藻细胞浮起不下沉即可;另一根较短,长30厘米,直径10毫米,为比较硬的料管,用以排气;将此塑料桶放入微藻培养室中培养,室内空调控温,日光灯管照明,以打开灯管的数量多少来控制光照强度,提供连续不间断光照,连续培养8天,前4天调节温度至28℃,光照强度18000lux,因塑料桶壁的阻挡和吸收作用,到达藻液的实际光照强度为12000lux,后4天,调节温度至30℃,光照强度20000lux,后转入下一步骤;

步骤(4)藻细胞收集

取步骤3藻液1000份,加入0.5份甲壳素,充分搅拌15分钟,再加入0.8份明矾,搅拌20分钟,静置、沉淀36小时,弃上清液,取底部红色藻泥,藻细胞收集完毕;

步骤1中所述土壤浸出液制备方法:取树林中松散、富含有机质的上层土壤1千克,加自来水5升,煮沸20分钟,将泥浆倒入烧杯中,静置24小时,后吸取上清液,倒入三角烧瓶中,加棉花塞,煮沸15分钟,冷却,静置沉淀12小时,取上清液即得土壤浸出液,装入磨口塞试剂瓶,密封,贴上标签,置于4℃冰箱备用;

步骤1中所述人尿制备方法:取一3000毫升三角烧瓶,装入人尿1500毫升,静置,自然发酵48小时,放在电炉上加热,煮沸3分钟,冷却,装入磨口塞棕色试剂瓶,密封,置于4℃冰箱冷藏备用;

接种用的雨生红球藻预先进行提纯,以确保接种时藻种为纯种且处于生长旺盛的指数生长期;

步骤1中各种营养盐要按配方中提供的顺序加入,以免发生化学反应;

步骤1中各种无机营养盐和维生素预先配成母液且置于4℃冰箱冷藏保存备用,放置时间不要超过30天;

步骤1和2中所用三角烧瓶等玻璃仪器均需洗刷干净放在85℃烘箱中烘干后使用;

步骤2所述接种过程需在上午9-10点且在无菌操作台上进行;

步骤3中所用塑料桶要选用透光性好且韧性强度高,以提高光能利用率和塑料桶使用寿命;

步骤1中所用化学药品纯度均需化学纯级别。