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专利号: 2014106249997
申请人: 浙江海洋学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-24
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种对非酒精性脂肪肝病细胞模型具有修复作用的文蛤酶解寡肽,其特征在于包含如下氨基酸序列:Gln Leu Asn Trp Asp。

2.一种如权利要求1所述对非酒精性脂肪肝病细胞模型具有修复作用的文蛤酶解寡肽的制备方法,其特征在于包括如下步骤:①建立非酒精性脂肪肝病细胞模型,将正常肝细胞置于DMEM培养液、37℃、5%CO2的培养箱中培养,待细胞贴壁达到80%后弃培养液,0.25%的胰蛋白酶消化,传代培养,选择生长状态良好的细胞,用软脂酸对正常肝细胞进行诱导,处理12h、24h、48h、72h后收集细胞并测定甘油三脂(TG)含量,选择使正常肝细胞TG含量明显增加且细胞生长良好的诱导时间,以建立体外非酒精性脂肪肝病细胞模型;

②将文蛤去壳取内脏后放入蒸馏水中轻轻搅拌,洗去杂质后匀浆,存放于-20℃或-80℃备用;

③将步骤②制得的文蛤匀浆液进行酶解,经过超滤膜,分别截取5KDa分子量以下、

5KDa~8KDa以及8KDa分子量以上的3个不同分子段酶解液,用G-25葡聚糖凝胶层析,对所得的各个峰进行收集,获得的产物分别作用于步骤①的非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞,以筛选使得非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞TG含量减低率最大的酶解液进行收集,然后将收集的最大峰酶解液于280nm下过Zorbax SB-C18色谱柱,得到两个洗脱峰,收集大的洗脱峰高效液相检测其纯度显示为单一组分,并测定其氨基酸序列,确认为Gln Leu Asn Trp Asp。

3.根据权利要求2所述的对非酒精性脂肪肝病细胞模型具有修复作用的文蛤酶解寡肽的制备方法,其特征在于所述步骤①中软脂酸为15μg/mL,对正常肝细胞进行诱导。

4.根据权利要求2所述的对非酒精性脂肪肝病细胞模型具有修复作用的文蛤酶解寡肽的制备方法,其特征在于所述步骤③中使得非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞TG含量减低率最大的为5KDa分子量以下分子段的酶解液,其TG含量降低率达54.2%。

5.根据权利要求2所述的对非酒精性脂肪肝病细胞模型具有修复作用的文蛤酶解寡肽的制备方法,其特征在于所述步骤③中对文蛤匀浆液分别用5种蛋白酶进行酶解,该5种蛋白酶分别为中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶。

6.根据权利要求4所述的对非酒精性脂肪肝病细胞模型具有修复作用的文蛤酶解寡肽的制备方法,其特征在于步骤③中使得非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞TG含量减低率最大的酶为碱性蛋白酶,酶解条件为40℃、pH为9.5、料液比为1:2、酶解时间为8h且加酶量为1000U/g。