1.悬浮培养细胞生产金线莲多糖的方法,其特征在于,是一种利用细胞培养反应器对金线莲细胞培养,添加植物生长调节剂和生物酶制剂激活细胞生长并缩短细胞培养周期,来生产金线莲多糖的方法,具体步骤为:(1)单细胞制备
取金线莲蒴果消毒后进行无菌播种,播种培养基为改良的1/2MS固体培养基,待萌发成原球茎后取出,选择色泽鲜艳、个体硕大、活力旺盛的原球茎,采用酶解法分离制备单细胞,并离心过滤除杂,收集单细胞;
(2)单细胞系培养
将收集到的单细胞接种到含有改良的1/2MS液体培养基的挡板摇瓶中,鲜细胞接种量为25±2g/L,光强度为1000-3000lux,色温为4000-6000K,震荡培养,调pH值为5.6±2,温度22±2℃,当细胞密度达到10000-20000个/mL,即可放大培养;
(3)细胞群放大培养
将培养好的单细胞系接种于含有改良的1/2MS液体培养基的气升式搅拌发酵罐中,培养基中加入:NAA 0.1-2mg/L,6-BA 0.1-2mg/L,果胶酶50-100mg/L,纤维素酶10-50mg/L,鲜细胞接种量为30±2g/L,光强度为1000-3000lux,色温为4000-6000K,气升搅拌悬浮培养,调节通气速率和搅拌速率维持溶氧在30%,调节补料液和NaOH溶液流加量保持pH在
5.6±4;
(4)当细胞密度达到60000-80000个/ml 即可停止培养,时间为15-18天,采用低速离心或过滤法收集金线莲细胞,再用常规方法提取金线莲多糖。