1.桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)染色体玻片标本的制备：将桑树嫩叶于浓度为0.002M的8-羟基喹啉水溶液中、

25℃避光预处理3小时，用固定液固定后用水冲洗，然后将桑叶于1/15M的KCl溶液中、

25℃低渗30～60分钟，低渗后用水冲洗，再将冲洗后的桑叶于含3-5％(W/V)纤维素酶和

3-5％(W/V)果胶酶的混合酶液中、25℃酶解2-5小时，用水冲洗后在水中处理10～120分钟；然后将材料磨成匀浆，加入固定液，静置5min弃沉淀，收集上层细胞悬液，将收集的细胞悬液再静置30min，收集下层细胞悬液，然后将细胞悬液滴在载玻片上，微微加热烤干，再将载玻片置于35-40℃的烘箱中烘片30min-120min，-20℃保存备用；

(2)5S rDNA和25S rDNA探针标记：分别以含有SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的重组质粒为模板，分别以SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3与SEQ ID NO.4为引物，采用PCR法合成地高辛或生物素标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的探针，分别得5S rDNA探针和25S rDNA探针；

(3)染色体荧光原位杂交：将步骤(1)保存的染色体玻片标本在37℃条件下烘片2h，然后用RNase浓度为100μg/mL的2×SSC溶液在37℃温育1h，再用蛋白酶K浓度为1μg/mL的2×SSC溶液在37℃孵育15min，接着在37℃用2×SSC洗涤5min，在18-25℃用2×SSC洗涤2次，每次5min；然后在72℃条件下用含70％(V/V)去离子甲酰胺的2×SSC溶液变性

10min，完毕在18-25℃下依次用-20℃预冷的体积分数为70％、90％和100％的无水乙醇各处理5min，晾干；然后向染色体玻片标本上加封阻液，并在37℃封阻15min，再用含5S rDNA探针或/和25S rDNA探针的变性杂交液加在封阻的染色体玻片标本上，盖片后在80℃共变性10min；然后在37℃孵育过夜，接着在37℃下用含10％(V/V)去离子甲酰胺的2×SSC溶液洗10s，在37℃下用2×SSC溶液洗涤2次，每次3min，再在18-25℃下用含0.2％(V/V)吐温-20的4×SSC溶液洗3min；然后在37℃下用1×封闭液封闭20min，再在染色体玻片标本上滴加荧光标记的抗地高辛或生物素的抗体，在37℃避光孵育1h，然后在37℃下，用含

0.2％(V/V)吐温-20的4×SSC溶液洗3min，再在18-25℃下用含0.2％(V/V)吐温-20的

4×SSC溶液洗3min，接着在18-25℃下用浓度为1μg/mL的DAPI避光复染5min，用2×SSC溶液清洗2min后在染色体制片上滴加抗荧光淬灭剂，盖片，封片，镜检。

2.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：所述固定为用固定液于4℃条件下固定至少2小时，所述固定液为甲醇与冰乙酸体积比为3:1的溶液。

3.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：所述含有SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的重组质粒由如下方法制备：以川桑基因组DNA为模板，分别以SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3与SEQ ID NO.4为引物对进行PCR扩增，分别获得如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，然后分别与pMD19-T载体连接，分别得含有SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的重组质粒。

4.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：合成所述探针的反应体系为：50pg含有SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的重组质粒，1μM SEQ ID NO.1与1μM SEQ ID NO.2或1μM SEQ ID NO.3与1μM SEQ ID NO.4所示的引物，200μM dATP，200μM dCTP，200μM dGTP，130μM dTTP，70μM DIG-dUTP或Biotin-dUTP，0.75μL聚合酶，5μL10×PCR Buffer，加ddH2O至总体积为50μL。

5.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：合成所述探针的反应条件为：95℃预变性2min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸40s，30次循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

6.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：所述杂交液各组分的终浓度如下：2×SSC，125ng/μL的鲑鱼精DNA，0.25％(W/V)SDS，10％(W/V)DS，

50％(V/V)去离子甲酰胺，6ng/μL探针。

7.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：所述变性杂交液的变性方法如下：将杂交液于95℃变性6min，再置冰上孵育至少10min。

8.根据权利要求1所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：所述封阻液为2×SSC，125ng/μL的鲑鱼精DNA，0.25％(W/V)SDS，10％(W/V)DS，50％(V/V)去离子甲酰胺。

9.根据权利要求1-8任一项所述桑树中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于：

所述荧光标记的抗地高辛抗体是浓度为2ng/μL的荧光素标记的抗地高辛抗体，所述荧光标记的抗生物素抗体是浓度为10ng/μL的Cy3标记的抗生物素抗体。