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专利号: 2014101778246
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种海蜇石蜡切片制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1、取海上现场打捞的新鲜海蜇,分割,取伞,切成2×2cm~6×6cm组织块;

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液,4℃固定8~10h,进行修块0.5×0.5×0.5cm;4℃下用酒精醋酸甲醛混合固定液再固定10~12h;

S3、步骤S2所得组织块多次放入乙醇和二甲苯中进行脱水和透明,具体如下:浓度80%的乙醇2~4h→90%乙醇1~1.5h→95%乙醇1~1.5h→100%乙醇30~45min→100%乙醇30~45min→浓度1/3的二甲苯30~40min→1/2二甲苯30~40min→全二甲苯

30~40min→全二甲苯30~40min;

S4、步骤S3所得组织块放入二甲苯:石蜡为1:1的混合物中30min~1h、58~60℃全石蜡

30min~1h浸2次、取出包埋盒,报纸包好放入4℃冷却30min;取出冷却后的蜡块,包埋机包埋,包埋好的石蜡块,放在冷台上冷却1h;

S5、对步骤S4所得石蜡块进行切片,厚度为0.6um,所得切片放入30%乙醇浸泡10~

20s、40~45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上,37~40℃烘片30min;

S6、脱蜡复水:将步骤S5所得组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20~30min后取出,多次放入二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水,具体流程:全二甲苯10min→全二甲苯8min→

2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100%乙醇2~3min→100%乙醇2~3min→95%乙醇2~3min→90%乙醇2~3min→80%乙醇2~3min→70%乙醇2~3min→

60%乙醇2~3min→50%乙醇2~3min→双蒸水3~5min;

S7、染色与封片:采用苦味酸-酸性复红染色方法,其中,苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6~8min,中性树胶封片。

2.一种海蜇石蜡切片制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1、取盐渍2~3个月水分含量在50~64%之间的盐渍成熟的海蜇伞,洗去表面盐分,切成1×4cm~3×6cm长条;

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液,室温固定6~8h,进行修块0.5×0.5×0.5cm;室温,用酒精醋酸甲醛混合固定液再固定6~8h;

S3、步骤S2所得组织块多次放入乙醇和二甲苯中进行脱水和透明,具体如下:浓度80%的乙醇2~4h→90%乙醇1~1.5h→95%乙醇1~1.5h→100%乙醇30~45min→100%乙醇30~45min→浓度1/3二甲苯30~40min→1/2二甲苯30~40min→全二甲苯30~40min→全二甲苯30~40min;

S4、步骤S3所得组织块放入1:1二甲苯:石蜡30min~1h、58~60℃全石蜡30min~1h浸2次、取出包埋盒,报纸包好放入4℃冷却30min;取出冷却后的蜡块,包埋机包埋,包埋好的石蜡块,放在冷台上冷却1h;

S5、步骤S4所得石蜡块切片,厚度为0.6um,切片放入30%乙醇浸泡10~20s、40~45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上,37~40℃烘片30min;

S6、脱蜡复水:将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20~30min后取出,放入梯度浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水,具体流程如下:全二甲苯10min→全二甲苯

8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100%乙醇2~3min→

100%乙醇2~3min→95%乙醇2~3min→90%乙醇2~3min→80%乙醇2~3min→70%乙醇

2~3min→60%乙醇2~3min→50%乙醇2~3min→双蒸水3~5min;

S7、染色与封片:采用苦味酸-酸性复红染色方法,其中,苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6-8min,中性树胶封片。

3.一种海蜇石蜡切片制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1、取盐渍海蜇伞切成1×4cm~3×6cm长条;料液比1:8~1:10,清水浸泡6~12小时,换水3~6次;

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液,室温固定6~8h,进行修块0.5×0.5×0.5cm;室温,酒精醋酸甲醛混合固定液再固定8~10h;

S3、步骤S2所得组织块放入不同浓度的乙醇和二甲苯中进行脱水和透明,具体如下:浓度80%乙醇2~4h→90%乙醇1~1.5h→95%乙醇1~1.5h→100%乙醇30~45min→

100%乙醇30~45min→浓度1/3二甲苯30~40min→1/2二甲苯30~40min→全二甲苯30~

40min→全二甲苯30~40min;

S4、步骤S3所得组织块放入1:1二甲苯:石蜡30min-1h、58~60℃全石蜡30min~1h浸2次、取出包埋盒,报纸包好放入4℃冷却30min;取出冷却后的蜡块,包埋机包埋,包埋好的石蜡块,放在冷台上冷却1h;

S5、步骤S4所得石蜡块切片,厚度为0.6um,切片放入30%乙醇浸泡10~20s、40~45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上,37~40℃烘片30min;

S6、脱蜡复水:将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20-30min后取出,放入梯度浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水,具体流程如下:全二甲苯10min→全二甲苯

8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100%乙醇2~3min→

100%乙醇2~3min→95%乙醇2~3min→90%乙醇2~3min→80%乙醇2~3min→70%乙醇

2~3min→60%乙醇2~3min→50%乙醇2~3min→双蒸水3~5min;

S7、染色与封片:采用苦味酸-酸性复红染色方法,其中,苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6~8min,中性树胶封片。