利索能及
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专利号: 2014100152184
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种天然哺乳动物尿酸酶制备方法, 其特征在于, 所述方法包括如下步骤 :

1) 预处理 : 将新鲜哺乳动物肝脏均质破碎后, 用 pH 8.2的缓冲液洗涤, 洗涤沉淀用 pH 10.2的缓冲液溶解, 得尿酸酶初提液 ;

2) 粗纯化 : 将上述初提液进行硫酸铵分级沉淀, 复溶缓冲液溶解, 复溶液进行阴离子交换层析纯化, 得尿酸酶粗纯品溶液 ;

3) 精纯化 : 将上述尿酸酶粗纯品溶液进行亲和层析纯化, 得尿酸酶纯品溶液;

所述的哺乳动物为猪;

步骤 1) 预处理所述洗涤缓冲液为磷酸盐缓冲液; 洗涤缓冲液浓度为20mM ; 以体积质量比 mL.g 计, 洗涤缓冲液与动物肝脏的混合比例为15:1;

步骤 1) 预处理所述溶解缓冲液为碳酸盐缓冲液 ; 溶解缓冲液浓度为50mM; 以体积质量比 mL:g 计,溶解缓冲液与动物肝脏洗涤后沉淀的混合比例为75∶1;

步骤 2) 粗纯化所述沉淀尿酸酶蛋白的硫酸铵饱和度为10%;

步骤 2) 粗纯化所述尿酸酶蛋白复溶缓冲液与预处理所述溶解缓冲液相同 ; 复溶缓冲液体积为尿酸酶初提液体积的1/3;

步骤 2) 粗纯化所述阴离子交换层析纯化介质为偶联二乙基(2-羟丙基)氨基乙基或二乙氨基乙基基团的琼脂糖系列离子交换介质;

步骤 2) 粗纯化所述阴离子交换层析纯化包含下述步骤 : 待阴离子交换层析柱用复溶缓冲液平衡后, 将硫酸铵沉淀复溶样品进行上样, 复溶缓冲液复平衡后, 用含 0.2M氯化钠的复溶缓冲液洗脱, 收集洗脱样品;

步骤 3) 精纯化所述亲和层析纯化包含下述步骤:待黄嘌呤亲和层析柱用复溶缓冲液平衡后, 将尿酸酶粗纯品样品进行上样, 复溶缓冲液复平衡后, 用含0.09mM黄嘌呤的复溶缓冲液洗脱, 收集洗脱样品。

2.如权利要求 1 所述的制备方法, 其特征在于:步骤 3) 精纯化所述尿酸酶精纯品, 其纯度测定方法为常规还原型十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳或全梯度反相-高效液相色谱测定。