1.一种由铁皮石斛类原球茎快速繁殖成苗的专用系列培养基,其特征在于该系列培养基包括萌发培养基A、增殖诱导培养基B、分化培养基C、壮苗培养基D或E、和生根培养基F,所述各培养基中组分以1L培养基计,含量分别为:a.培养基A:NH4NO3:1600-2000mg、KNO3:1800-2300mg、MgSO4·7H2O:330-380mg、KH2PO4:
150-180mg、CaCl2:330-360mg、KI:0.65-0.85mg、H3BO3:6.0-6.6mg、MnSO4·4H2O:22.0-
25.0mg、ZnSO4·7H2O:8.5-9.0mg、Na2MoO4·2H2O:0.18-0.25mg、CuSO4·5H2O:0.015-
0.025mg、CoCl2·6H2O:0.015-0.025mg、Na2-EDTA:37.0-38.0mg、FeSO4·7H2O:27.5-28.5mg、肌醇80-150mg、烟酸0.2-0.6mg、盐酸吡哆醇0.2-0.5mg、盐酸硫胺素0.08-0.15mg、甘氨酸
1.7-2.5mg、琼脂6.5-7.5g、白砂糖20-30g;
b.培养基B:(NH4)2SO4:460-480mg、KNO3:2800-2850mg、MgSO4·7H2O:175-185mg、KH2PO4:
400-450mg、CaCl2:125-140mg、KI:0.65-0.85mg、H3BO3:1.6-1.9mg、MnSO4·4H2O:4.0-4.5mg、ZnSO4·7H2O:1.3-1.5mg、Na2-EDTA:37.0-38.0mg、FeSO4·7H2O:27.5-28.5mg、烟酸0.2-
0.6mg、盐酸吡哆醇0.2-0.5mg、盐酸硫胺素0.8-1.0mg、甘氨酸1.7-2.5mg、萘乙酸0.1-
0.5mg、6-苄氨基嘌呤0.2-1.0mg、土豆80-150g、琼脂6.5-7.5g、白砂糖20-30g;
c.培养基C:(NH4)2SO4:460-480mg、KNO3:2800-2850mg、MgSO4·7H2O:175-185mg、KH2PO4:
400-450mg、CaCl2:125-140mg、KI:0.65-0.85mg、H3BO3:1.6-1.9mg、MnSO4·4H2O:4.0-4.5mg、ZnSO4·7H2O:1.3-1.5mg、Na2-EDTA:37.0-38.0mg、FeSO4·7H2O:27.5-28.5mg、烟酸0.2-
0.6mg、盐酸吡哆醇0.2-0.5mg、盐酸硫胺素0.8-1.0mg、甘氨酸1.7-2.5mg、萘乙酸0.1-
0.5mg、6-苄氨基嘌呤0.1-0.5mg、土豆80-150g、琼脂6.5-7.5g、白砂糖20-30g;
d.培养基D:1-5g花宝二号、0.1-0.8g水解酪蛋白、萘乙酸0.1-0.5mg、6-苄氨基嘌呤
0.1-0.5mg、土豆80-150g、琼脂6.5-7.5g、白砂糖20-30g;
e.培养基E:(NH4)2SO4:128-135mg、KNO3:1800-2500mg、MgSO4·7H2O:250-300mg、NaH2PO4·H2O:130-160mg、CaCl2:150-170mg、KI:0.65-0.85mg、H3BO3:2.3-3.0mg、MnSO4·
4H2O:9.5-11.0mg、ZnSO4·7H2O:1.6-2.2mg、Na2MoO4·2H2O:0.18-0.25mg、CuSO4·5H2O:
0.015-0.025mg、CoCl2·6H2O:0.015-0.025mg、Na2-EDTA:37.0-38.0mg、FeSO4·7H2O:27.5-
28.5mg、肌醇80-150mg、烟酸0.9-1.6mg、盐酸吡哆醇1.0-1.8mg、盐酸硫胺素9.6-10.5mg、萘乙酸0.3-0.8mg、6-苄氨基嘌呤0.4-1.0mg、土豆80-150g、琼脂6.5-7.5g、白砂糖20-30g;
f.培养基F:NH4NO3:800-830mg、KNO3:950-1000mg、MgSO4·7H2O:175-190mg、KH2PO4:60-
85mg、CaCl2:160-250mg、KI:0.65-0.85mg、H3BO3:6.0-6.6mg、MnSO4·4H2O:22.0-25.0mg、ZnSO4·7H2O:8.5-9.0mg、Na2MoO4·2H2O:0.18-0.25mg、CuSO4·5H2O:0.015-0.025mg、CoCl2·6H2O:0.015-0.025mg、Na2-EDTA:37.0-38.0mg、FeSO4·7H2O:27.5-28.5mg、肌醇80-
150mg、烟酸0.2-0.6mg、盐酸吡哆醇0.2-0.5mg、盐酸硫胺素0.08-0.15mg、甘氨酸1.7-
2.5mg、萘乙酸0.1-0.8mg、吲哚丁酸0.2-1.0mg、活性炭0.5-1.5mg、香蕉100-150g、琼脂6.5-
7.5g、白砂糖20-30g。
2.一种权利要求1所述系列培养基的配制方法,其特征在于配制过程以1L培养基计,步骤如下:a.量取约500ml水放入热水锅中并加热;
b.称取6.5-7.5g琼脂粉;
c.待水温达到80℃时加入琼脂粉,搅拌均匀,加热至沸腾;
d.加入权利要求1中各培养基除琼脂粉、活性炭、白砂糖和土豆或香蕉以外的所有组分;
e.称取80-150g土豆、100-150g香蕉,将其切成小块并用榨汁机榨汁;
f.将榨好的土豆汁、香蕉汁过滤至热水锅中;
g.加入活性炭0.5-1.5mg;
h.加入白砂糖20-30g;
i.待药品和白砂糖全部溶解后加水定容至1L并搅拌均匀;
j.用pH试纸调pH值为5.8-6.2;
k.分装,将配制好的培养基倒入组培瓶,倒入量视组培瓶容量大小而定,一般为容器的
1/5左右;
l.高压蒸汽灭菌,121℃,1.5Mpa,20min;
m.灭完菌的培养基放入接种室内静置,让其降温后凝固;
在配制培养基B、C、D、E、F时要进行步骤e、f;
在配制培养基F时要进行步骤g。
3.一种使用权利要求1所述系列培养基由铁皮石斛类原球茎快速繁殖成苗的组培方法,其特征包括以下的步骤:(1)铁皮石斛种子的无菌萌发
a.在超净工作台上将铁皮石斛种子依次用酒精浸泡1min,次氯酸钠溶液消毒20min,无菌水漂洗3次,每次1min;
b.将彻底消毒并漂洗后的种子取出,从种子的一端将其切开,切开后,将粉末状胚均匀的播撒到培养基A上;
c.置于温度为25℃,无光照的环境下进行培养;
d.每天对其培养环境臭氧灭菌1h;
e.30天左右种子萌发之后,将组培瓶置于温度为25℃,光照2000lx,每日光照12h的环境下进行培养,每天对其培养环境臭氧灭菌1h;
f.45天左右,萌发的种子形成原球茎;
(2)铁皮石斛原球茎的增殖
a.在超净工作台上用勺子将种子萌发形成的原球茎均匀的转入到培养基B上;
b.置于温度为25℃,光照2000lx,每日光照12h的环境下进行培养;
c.每天对其培养环境臭氧灭菌1h;
d.原球茎长出淡黄色愈伤组织,45天,愈伤组织不断分裂增殖成类原球茎;
(3)铁皮石斛类原球茎的分化
a.在超净工作台上用勺子将类原球茎挑出并均匀的转入到培养基C上;
b.置于温度为25℃,光照2000lx,每日光照12h的环境下进行培养;
c.每天对其培养环境臭氧灭菌1h;
d.60-90天,类原球茎分化成小苗;
(4)铁皮石斛小苗的壮苗
a.在超净工作台上用镊子小心的夹出类原球茎分化形成的小苗放置在事先消毒过的大培养皿上,并把小苗插入培养基D或E中;
b.置于温度为25℃,光照2000lx,每日光照12h的环境下进行培养;
c.每天对其培养环境臭氧灭菌1h;
d.60-90天,小苗成长为长势良好的铁皮石斛大苗;
(5)铁皮石斛大苗的生根
a.在超净工作台上用镊子小心的夹出铁皮石斛大苗放置在事先消毒过的大培养皿上;
b.将大苗一根一根的挑出并插入培养基F中;
c.置于温度为25℃,光照2000lx,每日光照12h的环境下进行培养;
d.每天对其培养环境臭氧灭菌1h;
e.60-90天,大苗成长为完整的铁皮石斛组培苗;
(6)铁皮石斛组培苗的炼苗与移栽
a.将组培瓶里的成苗放置在自然光下炼苗一周;
b.将瓶苗取出并洗净根部培养基后,移栽至泥炭土和苔藓体积比为1:1的混合基质中,成活率在90%以上。
4.根据权利要求3所述的由铁皮石斛类原球茎快速繁殖成苗的组培方法,其特征在于所述步骤(1)所述的铁皮石斛种子采集的是野生铁皮石斛或者人工培育的铁皮石斛。